Repositorio UFRO · Omeka S

EVALUATION OF THE ACROSOMAL MEMBRANE IN BOVINE SPERMATOZOA - EFFECTS OF PROTEINASE-INHIBITORS

Primer Autor	SANCHEZ, R
Co-autores	RISOPATRON, J SEPULVEDA, G PENA, P MISKA, W
Título	EVALUATION OF THE ACROSOMAL MEMBRANE IN BOVINE SPERMATOZOA - EFFECTS OF PROTEINASE-INHIBITORS
Editorial	BUTTERWORTH-HEINEMANN
Revista	THERIOGENOLOGY
Lenguaje	en
Resumen	Thawed bovine spermatozoa are characterized by a lack of homogeneity in the acrosomal membrane. Therefore, it is difficult to visualize the acrosome to assess morphology. Synthetic proteinase inhibitors were tested on thawed bovine semen for their effect on the integrity of acrosomal membranes. The proteinase inhibitors 4-nitrophenyl-4-guanidinobenzoate (NPGB) and N-L-p-tosyl-L-lysine-chloromethylketone (TLCK) were added to a medium containing spermatozoa separated on a percoll gradient. After incubation for 30 min at 38 degrees C in 5% CO2, 95% air (final concentration 1 mM), the action of these inhibitors was controlled by measuring the activity of acrosome proteinases. The acrosomal membrane was evaluated by means of a dual stain procedure (trypan blue, Giemsa). In contrast to spermatozoa that had been incubated with proteinase inhibitor-free solution, samples that had been incubated with TLCK showed homogeneity in 90% of the acrosomal membranes and excellent visualization of the acrosome itself; in the NPGB-treated samples, homogeneous staining was observed in 83% of spermatozoa (P < 0.0005). It is concluded that alteration of the acrosomal membrane in thawed semen is not directly caused by freezing-thawing, but may be due to activation of acrosomal proteinases, which is increased during staining procedures. The addition of proteinase inhibitors before staining offers a new possibility for improved assessment of the acrosome in bovine spermatozoa.#Los espermatozoides bovinos descongelados se caracterizan por una falta de homogeneidad en la membrana acrosómica. Por lo tanto, es difícil visualizar el acrosoma para evaluar su morfología. Se probaron inhibidores sintéticos de proteinasas en semen bovino descongelado para determinar su efecto sobre la integridad de las membranas acrosómicas. Los inhibidores de proteinasas 4-nitrofenil-4-guanidinobenzoato (NPGB) y N-L-p-tosil-L-lisina-clorometilcetona (TLCK) se añadieron a un medio que contenía espermatozoides separados en un gradiente de Percoll. Después de la incubación durante 30 min a 38 °C en 5 % de CO2, 95 % de aire (concentración final 1 mM), la acción de estos inhibidores se controló midiendo la actividad de las proteinasas del acrosoma. La membrana acrosómica se evaluó mediante un procedimiento de doble tinción (azul de tripano, Giemsa). A diferencia de los espermatozoides incubados con una solución sin inhibidores de proteinasas, las muestras incubadas con TLCK mostraron homogeneidad en el 90% de las membranas acrosómicas y una excelente visualización del acrosoma; en las muestras tratadas con NPGB, se observó una tinción homogénea en el 83% de los espermatozoides (P < 0,0005). Se concluye que la alteración de la membrana acrosómica en el semen descongelado no se debe directamente a la congelación-descongelación, sino que puede deberse a la activación de las proteinasas acrosómicas, la cual aumenta durante los procedimientos de tinción. La adición de inhibidores de proteinasas antes de la tinción ofrece una nueva posibilidad para una mejor evaluación del acrosoma en los espermatozoides bovinos.
Tipo de Recurso	artículo original
doi	10.1016/0093-691X(95)00018-4
Palabras Claves	BOVINE SPERMATOZOA PROTEINASE ACROSIN DUAL STAIN ACROSOME REACTION ESPERMATOZOIDES BOVINOS PROTEINASA ACROSINA TINCIÓN DOBLE REACCIÓN DEL ACROSOMA
Ubicación del archivo	http://dx.doi.org/10.1016/0093-691X(95)00018-4
Materias	BOVINE SPERMATOZOA PROTEINASE ACROSIN DUAL STAIN ACROSOME REACTION ESPERMATOZOIDES BOVINOS PROTEINASA ACROSINA TINCIÓN DOBLE REACCIÓN DEL ACROSOMA HUMAN-SPERM ACROSOME GUINEA-PIG SPERM TRYPSIN-INHIBITORS ZONA-PELLUCIDA PENETRATION PROTEOLYSIS Acrosoma del espermatozoide humano espermatozoides de cobaya inhibidores de la tripsina zona pelúcida penetración proteólisis
Disciplinas de la OCDE	Biología Celular Biología Molecular Ciencia Animal y lechería
Versión del recurso (Recomendado-único)	Version publicada
Título de la cita (Recomendado-único)	EVALUATION OF THE ACROSOMAL MEMBRANE IN BOVINE SPERMATOZOA - EFFECTS OF PROTEINASE-INHIBITORS
Revista/Libro	THERIOGENOLOGY
Tipo de ruta	suscripción
Access Rights	metadata
Derechos de acceso	metadata
Idioma	en
Identificador del recurso (Mandatado-único)	artículo original
Editorial	BUTTERWORTH-HEINEMANN
ISSN	0093-691X
Página de inicio (Recomendado-único)	761
Página final (Recomendado-único)	768
Categoría WOS	Reproductive Biology Veterinary Sciences
Id de Web of Science	WOS:A1995QH51500006