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RESONANCE ENERGY-TRANSFER DETERMINATION OF THE DISTANCE BETWEEN THE 4 CYSTEINE-364 RESIDUES IN SACCHAROMYCES-CEREVISIAE PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYKINASE

Primer Autor	Alvear M.
Co-autores	ENCINAS, MV HERRERA, L CARDEMIL, E
Título	RESONANCE ENERGY-TRANSFER DETERMINATION OF THE DISTANCE BETWEEN THE 4 CYSTEINE-364 RESIDUES IN SACCHAROMYCES-CEREVISIAE PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYKINASE
Editorial	ELSEVIER SCIENCE INC
Revista	ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
Lenguaje	en
Resumen	Each of the four subunits of the Saccharomyces cerevisiae phosphoenolpyruvate carboxykinase has one cysteine residue (Cys-364) that is protected against alkylation by MnATP and that is thought to be located at (or close to) the active site (M. Alvear, M. V. Encinas, S. Latshaw, R. G. Kemp, and E. Cardemil, 1992, Biochim. Biophys. Acta 1119, 35-38). To determine the distance relationships between these residues within this tetrameric enzyme, we have derivatized one of these reactive thiols with N-acetyl-N'-(5-sulfo-1-naphthyl) ethylenediamine (AEDANS) and the others progressively with 4- [N-[(acetoxy)ethyl]-N-methylamino]-7-nitro- benz-2-oxa-1,3-diazole (ANBD). In the doubly labeled protein nonradiative singlet-singlet energy transfer between AEDANS (donor) and ANBD (acceptor) was observed. The efficiency of the energy transfer is propertional to the number of occupied acceptor sites. From these data it has been determined that one of the acceptor sites is 33 Angstrom from the donor, and the remaining two sites are 44-46 Angstrom from the donor. Cross-linking experiments revealed that mainly cross-linked dimers were produced upon reaction of the enzyme with o-phthalaldehyde and dithiobissuccinimidylpropionate. We interpret these results as an indication that this tetrameric enzyme is most likely composed of an association of two dimers. (C) 1994 Academic Press, Inc.#Cada una de las cuatro subunidades de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa de Saccharomyces cerevisiae tiene un residuo de cisteína (Cys-364) que está protegido contra la alquilación por MnATP y que se cree que está ubicado en (o cerca de) el sitio activo (M. Alvear, M. V. Encinas, S. Latshaw, R. G. Kemp y E. Cardemil, 1992, Biochim. Biophys. Acta 1119, 35-38). Para determinar las relaciones de distancia entre estos residuos dentro de esta enzima tetramérica, hemos derivatizado uno de estos tioles reactivos con N-acetil-N'-(5-sulfo-1-naftil) etilendiamina (AEDANS) y los demás progresivamente con 4-[N-[(acetoxi)etil]-N-metilamino]-7-nitro-benz-2-oxa-1,3-diazol (ANBD). En la proteína doblemente marcada se observó una transferencia de energía singlete-singlete no radiativa entre AEDANS (donador) y ANBD (aceptor). La eficiencia de la transferencia de energía es proporcional al número de sitios aceptores ocupados. A partir de estos datos se ha determinado que uno de los sitios aceptores está a 33 Angstrom del donador, y los dos sitios restantes están a 44-46 Angstrom del donador. Los experimentos de reticulación revelaron que, tras la reacción de la enzima con o-ftalaldehído y ditiobissuccinimidilpropionato, se produjeron principalmente dímeros reticulados. Interpretamos estos resultados como un indicio de que esta enzima tetramérica probablemente está compuesta por la asociación de dos dímeros. © 1994 Academic Press, Inc.
Tipo de Recurso	artículo original
doi	10.1006/abbi.1994.1107
Palabras Claves	DEPENDENT PROTEIN-KINASE CROSS-LINKING REAGENT ORTHO-PHTHALALDEHYDE FLUORESCENT-PROBES CATALYTIC SUBUNIT SEQUENCE SITES ATP PROTEÍNA QUINASA DEPENDIENTE REACTIVO DE CRUZAMIENTO ORTO-FTALALDEHÍDO SONDAS FLUORESCENTES SUBUNIDAD CATALÍTICA SECUENCIA SITIOS ATP
Ubicación del archivo	http://dx.doi.org/10.1006/abbi.1994.1107
Materias	DEPENDENT PROTEIN-KINASE CROSS-LINKING REAGENT ORTHO-PHTHALALDEHYDE FLUORESCENT-PROBES CATALYTIC SUBUNIT SEQUENCE SITES ATP PROTEÍNA QUINASA DEPENDIENTE REACTIVO DE CRUZAMIENTO ORTO-FTALALDEHÍDO SONDAS FLUORESCENTES SUBUNIDAD CATALÍTICA SECUENCIA SITIOS ATP
Disciplinas de la OCDE	Biología Molecular Bioquímica
Versión del recurso (Recomendado-único)	Version publicada
Título de la cita (Recomendado-único)	RESONANCE ENERGY-TRANSFER DETERMINATION OF THE DISTANCE BETWEEN THE 4 CYSTEINE-364 RESIDUES IN SACCHAROMYCES-CEREVISIAE PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYKINASE
Revista/Libro	ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
Tipo de ruta	suscripción
Access Rights	Restringido
Derechos de acceso	Restringido
Idioma	en
Identificador del recurso (Mandatado-único)	artículo original
Editorial	ELSEVIER SCIENCE INC
ISSN	0003-9861
Página de inicio (Recomendado-único)	231
Página final (Recomendado-único)	238
Categoría WOS	Biochemistry & Molecular Biology Biophysics
Id de Web of Science	WOS:A1994MY85800005