Repositorio
Institucional

Isachenko, V.

Maettner, R.

Petrunkina, A. M.

Mallmann, P.

Rahimi, G.

Sterzik, K.

Sanchez, R.

Risopatron, J.

Damjanoski, I.

Isachenko, E.

Cryoprotectant-Free Vitrification of Human Spermatozoa in Large (up to 0.5 mL) Volume: a Novel Technology

CLIN LAB PUBL

CLINICAL LABORATORY

en

Background: The aim of this study was to develop and to test the aseptic technology of cryoprotectant-free vitrification of human spermatozoa in large volume (for intrauterine insemination). Spermatozoa, vitrified by this technology, are free of permeant cryoprotectants and are ready for further use immediately after warming without any additional treatment (centrifugation or separation in the gradient for removal of cryoprotectant). Methods: Each of 52 swim up-prepared ejaculates were divided into three aliquots and distributed into three treatment groups: Group 1: non-treated control; Group 2: spermatozoa cryopreserved by slow conventional freezing with glycerol-containing medium, and Group 3: spermatozoa vitrified in 0.5 mL insemination "French" straws in culture medium with 0.25 M sucrose. Sperm motility 1, 24 and 48 hours after warming, plasma membrane integrity and capacitation-like changes (spontaneous "cryo-capacitation" and acrosome reaction) were assessed after freezing-thawing. Results: In contrast to conventional freezing, spermatozoa vitrified with aseptic cryoprotectant-free technology displayed superior functional characteristics. The motility rate, integrity rates of cytoplasmic, and acrosomal membranes were significantly higher after vitrification than after conventional freezing (76 % vs 52 %, 54 % 28 % and 44 % vs 30 %, respectively) (p < 0.05). However, there were no differences between vitrification and conventional freezing in the presence of glycerol in terms of percentage of spermatozoa expressing CTC-capacitation pattern (11 % Vs 10 %, respectively) (p > 0.1). Conclusions: A basic protection from cryo-injury can be achieved for human spermatozoa using the novel technology of aseptic cryoprotectant-free vitrification in large volumes. (Clin. Lab. 2011;57:643-650)#Antecedentes: El objetivo de este estudio fue desarrollar y probar la tecnología aséptica de vitrificación sin crioprotectores de espermatozoides humanos en gran volumen (para inseminación intrauterina). Los espermatozoides, vitrificados mediante esta tecnología, están libres de crioprotectores permeables y están listos para su uso posterior inmediatamente después del calentamiento sin ningún tratamiento adicional (centrifugación o separación en gradiente para la eliminación del crioprotector). Métodos: Cada uno de los 52 eyaculados preparados mediante la técnica swim up se dividió en tres alícuotas y se distribuyó en tres grupos de tratamiento: Grupo 1: control sin tratamiento; Grupo 2: espermatozoides criopreservados mediante congelación convencional lenta con medio que contenía glicerol, y Grupo 3: espermatozoides vitrificados en pajuelas de inseminación "francesas" de 0,5 mL en medio de cultivo con 0,25 M de sacarosa. Se evaluó la motilidad espermática 1, 24 y 48 horas después del calentamiento, la integridad de la membrana plasmática y los cambios similares a la capacitación (criocapacitación espontánea y reacción acrosómica) después de la congelación-descongelación. Resultados: En contraste con la congelación convencional, los espermatozoides vitrificados con tecnología aséptica sin crioprotectores mostraron características funcionales superiores. La tasa de motilidad, las tasas de integridad de las membranas citoplasmática y acrosómica fueron significativamente más altas después de la vitrificación que después de la congelación convencional (76 % vs 52 %, 54 % 28 % y 44 % vs 30 %, respectivamente) (p < 0,05). Sin embargo, no hubo diferencias entre la vitrificación y la congelación convencional en presencia de glicerol en términos de porcentaje de espermatozoides que expresaban el patrón de CTC-capacitación (11 % vs 10 %, respectivamente) (p > 0,1). Conclusiones: Mediante la novedosa tecnología de vitrificación aséptica sin crioprotectores en grandes volúmenes, se puede lograr una protección básica contra el daño por crioconservación en los espermatozoides humanos. (Clin. Lab. 2011;57:643-650)

artículo original

pdf

Human

spermatozoa

vitrification

cryoprotectant-free

motility

membrane

acrosome

human sperm

human semen

liquid-nitrogen

dna integrity

cryopreservation

motility

vapor

phosphatidylserine

fertilization

insemination

Humano

espermatozoides

vitrificación

sin crioprotectores

motilidad

membrana

acrosoma

espermatozoides humanos

semen humano

nitrógeno líquido

integridad del ADN

criopreservación

motilidad

vapor

fosfatidilserina

fertilización

inseminación

Human

spermatozoa

vitrification

cryoprotectant-free

motility

membrane

acrosome

human sperm

human semen

liquid-nitrogen

dna integrity

cryopreservation

motility

vapor

phosphatidylserine

fertilization

insemination

Humano

espermatozoides

vitrificación

sin crioprotectores

motilidad

membrana

acrosoma

espermatozoides humanos

semen humano

nitrógeno líquido

integridad del ADN

criopreservación

motilidad

vapor

fosfatidilserina

fertilización

inseminación

Tecnologías que involucran la manipulación de Células , Tejidos, órganos o el organismo completo (Reproducción Asistida)#Andrología#Obstetricia y Ginecología

Cryoprotectant-Free Vitrification of Human Spermatozoa in Large (up to 0.5 mL) Volume: a Novel Technology

CLINICAL LABORATORY

suscripción

metadato

metadato

PMID 22029178

en

artículo original

versión publicada

CLIN LAB PUBL

1433-6510

643

650

Medical Laboratory Technology

Tecnología de laboratorio médico

pdf

WOS:000296994300001