Repositorio UFRO · Omeka S

Cloning and characterization of Chlorobium tepidum ferritin

Primer Autor	Watt, Richard K.
Co-autores	Yevenes, Alejandro E. Marquez, Valeria
Título	Cloning and characterization of Chlorobium tepidum ferritin
Editorial	ELSEVIER FRANCE-EDITIONS SCIENTIFIQUES MEDICALES ELSEVIER
Revista	BIOCHIMIE
Lenguaje	en
Resumen	The Chlorobium tepidum ferritin (CtFtn) gene was synthesized and cloned into a pET3a expression vector (Novagen). CtFtn was expressed in Escherichia coli and purified to electrophoretic homogeneity. Sequence analysis indicates that all the conserved amino acids required to form the Fe2+ oxidizing ferroxidase center are present. Ftn is highly conserved from bacteria to humans, each subunit folds into a 4-helical bundle (helices A D), with a long loop connecting helices B and C, plus a fifth short E-helix at the C-terminus. Calculations based on the secondary structure of CtFtn predict that each of these helices forms. However, the sequence of CtFtn shows a much longer C-terminus with a significant number of polar amino acids. Size-exclusion chromatography shows that CtFtn elutes at a size consistent with a 24 -subunit protein cage. Incubation of CtFtn with Fe2+ produced an increase in the absorbance at 310 nm consistent with the incorporation of iron inside CtFtn. Assays monitoring ferroxidase activity showed that CtFtn possesses ferroxidase activity but it is less active than human H-chain ferritin. Additionally, the iron loading capacity of CtFtn is significantly reduced compared to proteins from other organisms. We propose that the unique extended C-terminus in CtFtn causes the decreased iron loading in CtFtn and possibly influences the slower rate of iron oxidation at the ferroxidase center. (C) 2010 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.#El gen de la ferritina de Chlorobium tepidum (CtFtn) se sintetizó y clonó en un vector de expresión pET3a (Novagen). CtFtn se expresó en Escherichia coli y se purificó hasta alcanzar homogeneidad electroforética. El análisis de secuencia indica que están presentes todos los aminoácidos conservados necesarios para formar el centro ferroxidasa oxidante de Fe2+. Ftn está altamente conservada desde bacterias hasta humanos; cada subunidad se pliega en un haz de cuatro hélices (hélices A y D), con un bucle largo que conecta las hélices B y C, además de una quinta hélice E corta en el extremo C-terminal. Los cálculos basados en la estructura secundaria de CtFtn predicen que se forma cada una de estas hélices. Sin embargo, la secuencia de CtFtn muestra un extremo C-terminal mucho más largo con un número significativo de aminoácidos polares. La cromatografía de exclusión por tamaño muestra que CtFtn eluye a un tamaño consistente con una jaula proteica de 24 subunidades. La incubación de CtFtn con Fe2+ produjo un aumento en la absorbancia a 310 nm, consistente con la incorporación de hierro en CtFtn. Los ensayos que monitorizan la actividad ferroxidasa mostraron que CtFtn posee actividad ferroxidasa, pero es menos activa que la ferritina de cadena H humana. Además, la capacidad de carga de hierro de CtFtn está significativamente reducida en comparación con las proteínas de otros organismos. Proponemos que el singular extremo C-terminal extendido en CtFtn causa la disminución de la carga de hierro en CtFtn y posiblemente influye en la menor velocidad de oxidación del hierro en el centro ferroxidasa. © 2010 Elsevier Masson SAS. Todos los derechos reservados.
Tipo de Recurso	artículo original
Description	This work was supported by Brigham Young University, Universidad de la Frontera and Conicyt: Proyecto Insercion en la Academia 79090038. This work was supported by Brigham Young University, Universidad de la Frontera and Conicyt: Proyecto Insercion en la Academia 79090038.
doi	10.1016/j.biochi.2010.10.008
Formato Recurso	pdf
Palabras Claves	Ferritin Thermophilic Ferroxidase center Iron Anaerobic cerevisiae phosphoenolpyruvate carboxykinase dna-binding protein h-chain ferritins escherichia-coli iron incorporation crystal-structure biomimetic synthesis pyrococcus-furiosus ferroxidase center high-resolution Ferritina Termófilo Centro de ferroxidasa Hierro Anaeróbico cerevisiae fosfoenolpiruvato carboxiquinasa proteína de unión al ADN ferritinas de cadena H Escherichia coli incorporación de hierro estructura cristalina síntesis biomimética Pyrococcus furiosus centro de ferroxidasa alta resolución
Ubicación del archivo	http://dx.doi.org/10.1016/j.biochi.2010.10.008
Materias	Ferritin Thermophilic Ferroxidase center Iron Anaerobic cerevisiae phosphoenolpyruvate carboxykinase dna-binding protein h-chain ferritins escherichia-coli iron incorporation crystal-structure biomimetic synthesis pyrococcus-furiosus ferroxidase center high-resolution Ferritina Termófilo Centro de ferroxidasa Hierro Anaeróbico cerevisiae fosfoenolpiruvato carboxiquinasa proteína de unión al ADN ferritinas de cadena H Escherichia coli incorporación de hierro estructura cristalina síntesis biomimética Pyrococcus furiosus centro de ferroxidasa alta resolución
Disciplinas de la OCDE	Biología Molecular#Bioquímica#Microbiología
Título de la cita (Recomendado-único)	Cloning and characterization of Chlorobium tepidum ferritin
Revista/Libro	BIOCHIMIE
Tipo de ruta	hibrido verde
Access Rights	restringido
Derechos de acceso	restringido
Identificador alternativo	PMID 20971155
Idioma	en
Identificador del recurso (Mandatado-único)	artículo original
Versión del recurso (Recomendado-único)	versión publicada
Entidad financiadora	Brigham Young University Universidad de la Frontera ANID CONICYT Proyecto Insercion en la Academia 79090038
Referencia del Financiador (Mandatado si es aplicable-repetible)	Brigham Young University Universidad de la Frontera ANID CONICYT Proyecto Insercion en la Academia 79090038
Editorial	ELSEVIER FRANCE-EDITIONS SCIENTIFIQUES MEDICALES ELSEVIER
ISSN	0300-9084
Página de inicio (Recomendado-único)	352
Página final (Recomendado-único)	360
Categoría WOS	Biochemistry & Molecular Biology Bioquímica y Biología Molecular
Formato	pdf
Id de Web of Science	WOS:000287294400027