Repositorio UFRO · Omeka S

Cryoprotectant-free vitrification of fish (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa: first report

Primer Autor	Isachenko, V.
Co-autores	Merino, O. Sanchez, R. Risopatron, J. Isachenko, E. Katkov, I. I. Figueroa, E. Valdebenito, I. Mallmann, P.
Título	Cryoprotectant-free vitrification of fish (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa: first report
Editorial	WILEY-BLACKWELL
Revista	ANDROLOGIA
Lenguaje	en
Resumen	The aims of this investigation were to test a novel technology comprising cryoprotectant-free vitrification of the spermatozoa of rainbow trout and to study the ability of sucrose and components of seminal plasma to protect these cells from cryo-injuries. Spermatozoa were isolated and vitrified using three different media: Group 1: standard buffer for fish spermatozoa, Cortland (R) medium (CM, control); Group 2: CM + 1% BSA + 40% seminal plasma; and Group 3: CM + 1% BSA + 40% seminal plasma + 0.125 m sucrose. For cooling, 20-mu l suspensions of cells from each group were dropped directly into liquid nitrogen. For warming, the spheres containing the cells were quickly submerged in CM + 1% BSA at 37 degrees C with gentle agitation. The quality of spermatozoa before and after vitrification was analysed by the evaluation of motility and cytoplasmic membrane integrity with SYBR-14/propidium iodide staining technique. Motility (86%, 81% and 82% for groups 1, 2 and 3, respectively) (P > 0.1) was not decreased significantly. At the same time, cytoplasmic membrane integrity of spermatozoa of Groups 1, 2 and 3 was changed significantly (30%, 87% and 76% respectively) (P < 0.05). All tested solutions can be used for vitrification of fish spermatozoa with good post-warming motility. However, cytoplasmic membrane integrity was maximal in Group 2 (CM + 1% BSA + 40% seminal plasma). In conclusion, this is the first report about successful cryoprotectant-free cryopreservation of fish spermatozoa by direct plunging into liquid nitrogen (vitrification). Vitrification of fish spermatozoa without permeable cryoprotectants is a prospective direction for investigations: these cells can be successfully vitrified with 1% BSA + 40% seminal plasma.#Los objetivos de esta investigación fueron probar una nueva tecnología que comprende la vitrificación sin crioprotectores de los espermatozoides de trucha arcoíris y estudiar la capacidad de la sacarosa y los componentes del plasma seminal para proteger estas células de las lesiones por crioconservación. Los espermatozoides se aislaron y vitrificaron utilizando tres medios diferentes: Grupo 1: tampón estándar para espermatozoides de peces, medio Cortland (R) (CM, control); Grupo 2: CM + 1 % BSA + 40 % plasma seminal; y Grupo 3: CM + 1 % BSA + 40 % plasma seminal + 0,125 m sacarosa. Para el enfriamiento, se dejaron caer suspensiones de 20 μl de células de cada grupo directamente en nitrógeno líquido. Para el calentamiento, las esferas que contenían las células se sumergieron rápidamente en CM + 1 % BSA a 37 °C con agitación suave. La calidad de los espermatozoides antes y después de la vitrificación se analizó mediante la evaluación de la motilidad y la integridad de la membrana citoplasmática con la técnica de tinción SYBR-14/yoduro de propidio. La motilidad (86%, 81% y 82% para los grupos 1, 2 y 3, respectivamente) (P > 0,1) no disminuyó significativamente. Al mismo tiempo, la integridad de la membrana citoplasmática de los espermatozoides de los grupos 1, 2 y 3 cambió significativamente (30%, 87% y 76% respectivamente) (P < 0,05). Todas las soluciones probadas pueden usarse para la vitrificación de espermatozoides de peces con buena motilidad post-descongelación. Sin embargo, la integridad de la membrana citoplasmática fue máxima en el grupo 2 (CM + 1% BSA + 40% plasma seminal). En conclusión, este es el primer informe sobre la criopreservación exitosa de espermatozoides de peces sin crioprotectores mediante inmersión directa en nitrógeno líquido (vitrificación). La vitrificación de espermatozoides de peces sin crioprotectores permeables es una línea de investigación prometedora: estas células pueden vitrificarse con éxito con 1 % de BSA + 40 % de plasma seminal.
Tipo de Recurso	Artículo original
Description	This work was supported by Fund for the Promotion of Scientific and Technological Development (FONDEF, DO6I1020), Temuco, Chile. Este trabajo fue financiado por el Fondo para el Fomento del Desarrollo Científico y Tecnológico (FONDEF, DO6I1020), Temuco, Chile.
doi	10.1111/j.1439-0272.2011.01196.x
Formato Recurso	pdf
Palabras Claves	Sin crioprotectores pescado membrana espermatozoides vitrificación Cryoprotectant-free fish membrane spermatozoa vitrification NITRÓGENO LÍQUIDO TANQUE DE CRIOCONSERVACIÓN INTEGRIDAD DEL ADN HEPATITIS B ESPERMATOZOIDES MEMBRANA MOTILIDAD EMBRIONES CONTAMINACIÓN TRANSMISIÓN LIQUID-NITROGEN CRYOPRESERVATION TANK DNA INTEGRITY HEPATITIS-B SPERM MEMBRANE MOTILITY EMBRYOS CONTAMINATION TRANSMISSION
Ubicación del archivo	http://dx.doi.org/10.1111/j.1439-0272.2011.01196.x
Materias	Sin crioprotectores pescado membrana espermatozoides vitrificación Cryoprotectant-free fish membrane spermatozoa vitrification NITRÓGENO LÍQUIDO TANQUE DE CRIOCONSERVACIÓN INTEGRIDAD DEL ADN HEPATITIS B ESPERMATOZOIDES MEMBRANA MOTILIDAD EMBRIONES CONTAMINACIÓN TRANSMISIÓN LIQUID-NITROGEN CRYOPRESERVATION TANK DNA INTEGRITY HEPATITIS-B SPERM MEMBRANE MOTILITY EMBRYOS CONTAMINATION TRANSMISSION
Título de la cita (Recomendado-único)	Cryoprotectant-free vitrification of fish (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa: first report
Revista/Libro	ANDROLOGIA
Editorial	WILEY-BLACKWELL
Tipo de ruta	hibrida#verde
Access Rights	metadato
Derechos de acceso	metadato
Idioma	en
Identificador del recurso (Mandatado-único)	Artículo original
Versión del recurso (Recomendado-único)	versión publicada
Referencia del Financiador (Mandatado si es aplicable-repetible)	ANID CONICYT FONDEF DO6I1020
ISSN	0303-4569
Página de inicio (Recomendado-único)	390
Página final (Recomendado-único)	395
Categoría WOS	Andrology Andrología
Formato	pdf
Id de Web of Science	WOS:000304439300054