Repositorio UFRO · Omeka S

CRISPR-Cas12 Application for the Detection of Pneumocystis jirovecii in Immunodepression Patients Through Fluorescent and Lateral Flow Colorimetric Assay

Primer Autor	Effer, Brian
Título	CRISPR-Cas12 Application for the Detection of Pneumocystis jirovecii in Immunodepression Patients Through Fluorescent and Lateral Flow Colorimetric Assay
Editorial	MDPI
Revista	INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
Lenguaje	en
Resumen	Pneumonia caused by Pneumocystis jirovecii poses a serious threat, particularly to immunocompromised patients such as those with HIV/AIDS, transplant recipients, or individuals undergoing chemotherapy. Its diagnosis is challenging because current methods, such as microscopy and certain molecular tests, have limitations in sensitivity and specificity, and require specialized equipment, which delays treatment initiation. In this context, CRISPR-Cas12-based methods offer a promising alternative: they are rapid, highly specific, sensitive, and low-cost, enabling more timely and accessible detection, even in resource-limited settings. We developed a simple and rapid detection platform based on the CRISPR-Cas12 coupled with lateral flow strips. A guide RNA was designed against DHPS, beta-tubulin, and mtLSU rRNA genes. The guide corresponding to beta-tubulin showed high sensitivity in the detection of P. jirovecii to produce a detectable fluorescence signal within the first 20-30 min. In addition, it demonstrated high specificity for P. jirovecii when DNA from other microorganisms was used. When coupled with lateral flow strips, high sensitivity and specificity were also observed for detecting positive samples, without the need for genetic amplification. CRISPR-Cas12 successfully detected P. jirovecii infection in an initial diagnostic application, demonstrating the potential of this method for integration into public health diagnostic systems, particularly in field, due to its adaptability, speed, and ease of use.La neumonía causada por Pneumocystis jirovecii representa una grave amenaza, especialmente para pacientes inmunocomprometidos como aquellos con VIH/SIDA, receptores de trasplantes o personas sometidas a quimioterapia. Su diagnóstico es complejo debido a que los métodos actuales, como la microscopía y ciertas pruebas moleculares, presentan limitaciones en sensibilidad y especificidad, y requieren equipos especializados, lo que retrasa el inicio del tratamiento. En este contexto, los métodos basados en CRISPR-Cas12 ofrecen una alternativa prometedora: son rápidos, altamente específicos, sensibles y de bajo costo, lo que permite una detección más oportuna y accesible, incluso en entornos con recursos limitados. Desarrollamos una plataforma de detección simple y rápida basada en CRISPR-Cas12 acoplada a tiras de flujo lateral. Se diseñó un ARN guía contra los genes DHPS, beta-tubulina y ARNr mtLSU. El ARN guía correspondiente a la beta-tubulina mostró alta sensibilidad en la detección de P. jirovecii, produciendo una señal de fluorescencia detectable en los primeros 20-30 minutos. Además, demostró una alta especificidad para P. jirovecii al utilizar ADN de otros microorganismos. Al combinarse con tiras de flujo lateral, también se observó una alta sensibilidad y especificidad para la detección de muestras positivas, sin necesidad de amplificación genética. CRISPR-Cas12 detectó con éxito la infección por P. jirovecii en una aplicación diagnóstica inicial, lo que demuestra el potencial de este método para su integración en sistemas de diagnóstico de salud pública, especialmente en el campo, debido a su adaptabilidad, rapidez y facilidad de uso.
Tipo de Recurso	artículo original
Description	CRISPR-Cas12 <italic>Pneumocystis jirovecii</italic> lateral flow assay diagnostic
doi	10.3390/ijms26178732
Formato Recurso	pdf
Palabras Claves	REAL-TIME PCR DIHYDROPTEROATE SYNTHASE DHPS BETA-TUBULIN GENE CARINII-PNEUMONIA DIAGNOSIS HIV IDENTIFICATION MUTATIONS INFECTION
Ubicación del archivo	http://dx.doi.org/10.3390/ijms26178732
Materias	REAL-TIME PCR DIHYDROPTEROATE SYNTHASE DHPS BETA-TUBULIN GENE CARINII-PNEUMONIA DIAGNOSIS HIV IDENTIFICATION MUTATIONS INFECTION
Disciplinas de la OCDE	Biotecnología Relacionada con la Salud Tecnología para la Identificación y Funcionamiento del ADN, Proteínas y Encimas y como influyen en la aparición de enfermedades y la mantención del bienestar Microbiología
Versión del recurso (Recomendado-único)	versión publicada
Tipo de ruta	dorada verde
Access Rights	acceso abierto
Derechos de acceso	acceso abierto
Id de Web of Science	WOS:001569785600001
Título de la cita (Recomendado-único)	CRISPR-Cas12 Application for the Detection of Pneumocystis jirovecii in Immunodepression Patients Through Fluorescent and Lateral Flow Colorimetric Assay
Identificador del recurso (Mandatado-único)	artículo original
Editorial	MDPI
Revista/Libro	INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
Categoría WOS	Biochemistry & Molecular Biology Chemistry, Multidisciplinary
Idioma	en
ISSN	1661-6596
License	CC BY 4.0
Condición de la licencia (Recomendado-repetible)	CC BY 4.0
Entidad financiadora	FONCIENCIAS UDM010-Universidad del Magdalena#Agencia Nacional de Investigacion y Desarrollo (ANID)-Chile , Scholarship Programa de Doctorado Nacional 2025 folio
Referencia del Financiador (Mandatado si es aplicable-repetible)	FONCIENCIAS UDM010-Universidad del Magdalena Agencia Nacional de Investigacion y Desarrollo (ANID)-Chile , Scholarship Programa de Doctorado Nacional 2025 folio [21251211]
Formato	pdf