Repositorio
Institucional

Zambrano, Fabiola

Tissue Cytometry Assay with Nuclear Segmentation for Quantifying NETotic Cells in Neutrophils Stimulated by Spermatozoa in Veterinary Species

MDPI

ANIMALS

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Upon activation, neutrophils perform three distinct functions: phagocytosis, degranulation of antimicrobial substances into the extracellular medium, and release of neutrophil extracellular traps. Determination of the nuclear area expansion of neutrophils activated to release neutrophil extracellular traps has become critical in demonstrating early neutrophil activation and has become standard. Here, we demonstrate an automated method for measuring nuclear area expansion in two different mammalian species: canine and bovine. For both species, neutrophils were isolated from peripheral blood and co-incubated with fresh spermatozoa for up to 120 min for canine neutrophil-spermatozoa and recently thawed cryopreserved spermatozoa up to 240 min for bovine neutrophil-spermatozoa. Fluorescence images were acquired using a TissueFAXS microscope and then analyzed using StrataQuest v.7.0 software. The images show the release of neutrophil extracellular traps upon activation with spermatozoa for both species, as evidenced by the co-localization of neutrophil elastase and DNA staining. Neutrophil nuclei were expanded as early as 15 min and were detected at up to 120 min in both species. Analysis by nuclei segmentation showed that the data sets generated for both species were reliable and consistent with previously published methods. The method was developed as an automated alternative for measuring the area expansion of neutrophil nuclei in different species.Tras su activación, los neutrófilos realizan tres funciones distintas: fagocitosis, degranulación de sustancias antimicrobianas en el medio extracelular y liberación de trampas extracelulares de neutrófilos. La determinación de la expansión del área nuclear de los neutrófilos activados para liberar estas trampas se ha vuelto crucial para demostrar la activación temprana de los neutrófilos y se ha convertido en un método estándar. En este trabajo, demostramos un método automatizado para medir la expansión del área nuclear en dos especies de mamíferos diferentes: canina y bovina. Para ambas especies, los neutrófilos se aislaron de sangre periférica y se co-incubaron con espermatozoides frescos durante un máximo de 120 minutos para los neutrófilos-espermatozoides caninos y con espermatozoides criopreservados recientemente descongelados durante un máximo de 240 minutos para los neutrófilos-espermatozoides bovinos. Las imágenes de fluorescencia se adquirieron utilizando un microscopio TissueFAXS y posteriormente se analizaron con el software StrataQuest v.7.0. Las imágenes muestran la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos tras la activación con espermatozoides en ambas especies, evidenciada por la colocalización de la elastasa de neutrófilos y la tinción de ADN. Los núcleos de los neutrófilos se expandieron a los 15 minutos y se detectaron hasta los 120 minutos en ambas especies. El análisis mediante segmentación nuclear demostró que los conjuntos de datos generados para ambas especies eran fiables y consistentes con métodos publicados previamente. Este método se desarrolló como una alternativa automatizada para medir la expansión del área de los núcleos de neutrófilos en diferentes especies.

artículo original

neutrophil extracellular traps

spermatozoa

bovine

canine

image cytometry

10.3390/ani15182742

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EXTRACELLULAR TRAP FORMATION

ACROSOME REACTION

SEMINAL PLASMA

MYELOPEROXIDASE

FERTILITY

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SEMINAL PLASMA

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Ciencia Animal y lechería

Biología Celular

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WOS:001579446500001

Tissue Cytometry Assay with Nuclear Segmentation for Quantifying NETotic Cells in Neutrophils Stimulated by Spermatozoa in Veterinary Species

artículo original

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ANIMALS

Agriculture, Dairy & Animal Science

Veterinary Sciences

Zoology

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2076-2615

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