Repositorio UFRO · Omeka S

Improved expression of green fluorescent protein in cattle embryos produced by ICSI-mediated gene transfer with spermatozoa treated with streptolysin-O

Primer Autor	Felmer, Ricardo
Co-autores	Sanchez-Villalba, Esther Arias, Maria Elena Loren, Pia Fuentes, Fernanda Pereyra-Bonnet, Federico Salamone, Daniel
Título	Improved expression of green fluorescent protein in cattle embryos produced by ICSI-mediated gene transfer with spermatozoa treated with streptolysin-O
Editorial	ELSEVIER SCIENCE BV
Revista	ANIMAL REPRODUCTION SCIENCE
Lenguaje	en
Resumen	The ICSI-sperm mediated gene transfer (ICSI-SMGT) has been used to produce transgenic mice with high efficiency, however, the efficiency of this technique in farm animals is still less than desirable. Pretreatment of sperm with membrane destabilizing agents can improve the efficiency of ICSI in cattle. The objective of the present study was to evaluate streptolysin-O (SLO) as a novel treatment to permeabilize the bovine sperm membrane and assess its effect on efficiency of generating transgenic embryos by ICSI-SMGT. First, there was evaluation of the plasma membrane integrity (SYBR/PI), acrosome membrane integrity (PNA/FITC), DNA damage (TUNEL) and binding capacity of exogenous DNA (Nick Translation) in bull sperm treated with SLO. Subsequently, there was assessment of embryonic development and the efficiency in generating transgenic embryos with enhanced expression of the gene for green fluorescent protein (EGFP). Results indicate that SLO efficiently permeabilizes the plasma and acrosome membranes of bull spermatozoa and increases binding of exogenous DNA mostly to the post-acrosomal region and tail without greatly affecting the integrity of the DNA. Furthermore, treatment of bull spermatozoa with SLO prior to the injection of oocytes by ICSI-SMGT significantly increased the rate of embryo expression of the EGFP gene. Future experiments are still needed to determine the effect of this treatment on the development and tansgene expression in fetuses and animals produced by ICSI-SMGT. La transferencia génica mediada por ICSI-espermatozoides (ICSI-SMGT) se ha utilizado para producir ratones transgénicos con alta eficiencia sin embargo, la eficiencia de esta técnica en animales de granja aún es inferior a la deseable. El pretratamiento de los espermatozoides con agentes desestabilizadores de membrana puede mejorar la eficiencia de la ICSI en bovinos. El objetivo del presente estudio fue evaluar la estreptolisina-O (SLO) como un nuevo tratamiento para permeabilizar la membrana del espermatozoide bovino y evaluar su efecto en la eficiencia de la generación de embriones transgénicos mediante ICSI-SMGT. Primero, se evaluó la integridad de la membrana plasmática (SYBR/PI), la integridad de la membrana acrosómica (PNA/FITC), el daño al ADN (TUNEL) y la capacidad de unión del ADN exógeno (Nick Translation) en espermatozoides de toro tratados con SLO. Posteriormente, se evaluó el desarrollo embrionario y la eficiencia en la generación de embriones transgénicos con expresión mejorada del gen para la proteína verde fluorescente (EGFP). Los resultados indican que el SLO permeabiliza eficazmente las membranas plasmática y acrosómica de los espermatozoides de toro y aumenta la unión del ADN exógeno, principalmente a la región posacrosómica y la cola, sin afectar significativamente la integridad del ADN. Además, el tratamiento de espermatozoides de toro con SLO antes de la inyección de ovocitos mediante ICSI-SMGT aumentó significativamente la tasa de expresión embrionaria del gen EGFP. Se requieren experimentos futuros para determinar el efecto de este tratamiento en el desarrollo y la expresión del gen tans en fetos y animales producidos mediante ICSI-SMGT.
Tipo de Recurso	Artículo original
Description	Esta investigación fue financiada por las Becas FONDECYT 11130724 y 1160467 de CONICYT, Chile, y las Becas de Investigación DI17-5006 y DI16-2001 de la Dirección de la Universidad de La Frontera. E. Sánchez y P. Loren recibieron una beca de doctorado de CONICYT, Gobierno de Chile. This research was supported by FONDECYT Grants 11130724, and 1160467 CONICYT, Chile and Directorate of Research Grants DI17-5006 and DI16-2001, Universidad de La Frontera. E. Sanchez and P. Loren were supported by a Doctoral scholarship by CONICYT, Government of Chile.
doi	10.1016/j.anireprosci.2018.07.005
Formato Recurso	pdf
Palabras Claves	SLO SMGT SLO SMGT
Ubicación del archivo	http://dx.doi.org/10.1016/j.anireprosci.2018.07.005
Categoría OCDE	Agriculture, Dairy & Animal Science# Reproductive Biology# Veterinary Sciences
Materias	SLO SMGT SLO SMGT
Disciplinas de la OCDE	Biotecnología agrícola Tecnología de modificación genética Ciencia Animal y lechería
Versión del recurso (Recomendado-único)	version publicada
Tipo de ruta	hibrida verde
Access Rights	acceso abierto
Derechos de acceso	acceso abierto
Id de Web of Science	WOS:000447110900015
Título de la cita (Recomendado-único)	Improved expression of green fluorescent protein in cattle embryos produced by ICSI-mediated gene transfer with spermatozoa treated with streptolysin-O
Identificador relacionado	hdl.handle.net/11336/91412
Identificador del recurso (Mandatado-único)	Artículo original
Editorial	ELSEVIER SCIENCE BV
Revista/Libro	ANIMAL REPRODUCTION SCIENCE
Categoría WOS	Agricultura, Lácteos y Ciencia Animal Biología Reproductiva Ciencias Veterinarias
ISSN	0378-4320
Idioma	en
Referencia del Financiador (Mandatado si es aplicable-repetible)	ANID FONDECYT 11130724 ANID FONDECYT 1160467 UFRO DI17-5006 UFRO DI16-2001
Descripción	This research was supported by FONDECYT Grants 11130724, and 1160467 CONICYT, Chile and Directorate of Research Grants DI17-5006 and DI16-2001, Universidad de La Frontera. E. Sanchez and P. Loren were supported by a Doctoral scholarship by CONICYT, Government of Chile.
Formato	pdf
Página de inicio (Recomendado-único)	130
Página final (Recomendado-único)	137
Entidad financiadora	ANID FONDECYT 11130724#ANID FONDECYT 1160467#UFRO DI17-5006#UFRO DI16-2001